elisa中为什么用pbst洗涤
洗涤缓冲液一般为含0.05% Tween20的中性PBS（即PBST），Tween20为一种非离子去垢剂，既含亲水基团，也含疏水基团，其在洗涤中的作用机理是，借助其疏水基团与经疏水性相互作用被动吸附于聚苯乙烯固相上蛋白的疏水基团形成疏水键，从而削弱蛋白与固相的吸附，同时在其亲水基团与液相中水分子的结合作用下，促使蛋白质脱离固相而进入液相，这样就可达到去掉非特异吸附物的目的。
elisa检测中二抗时间延长会造成什么影响
二抗孵育 参考二抗的说明书，按照适当比例用封闭液稀释辣根过氧化物酶标记的二抗。 吸尽洗涤液后，立即加入稀释好的二抗，室温或4℃在摇床上缓慢摇动孵育1~2小时。回收二抗。然后加入Western洗涤液，在摇床上缓慢摇动洗涤5-10分钟。吸尽洗涤液后，再加入洗涤液，洗涤5-10分钟。共洗涤3次。如果结果背景较高可以适当延长洗涤时间并增加洗涤次数。 前2步洗涤是为了洗去一抗和二抗的非特异性结合，洗涤的效果直接影响结果背景的深浅，所以洗涤一定要干净。洗涤液使用 TBST 或者 PBST,其中的 Tween20 有助于去除非特异性的结合，减少背景。同时短时间多次的洗膜比长时间少次数的洗膜更有效。 第3步TBS洗涤是为了洗去膜上的Tween-20,因为它可以阻碍底物的沉积。 注意事项 1) 抗体保存注意事项： 2)收到抗体后按要求离心后再打开管盖进行分装和保存! 3)对于大部分抗体，比较合适的保存方式是分装后保存在-20℃ . 4)分装的量以一次实验用完为好，最少不能少于10 ul每份。因为分装体积越小，抗体的浓度越可能会受到蒸发以及管壁吸附的影响。 5)复融后的分装抗体如果一次用不完，将剩余母液保存在40℃，避免再冻起来! 6)绝对避免将抗体保存在自动除霜冰箱中。 7)大部分抗体收到后40℃短暂保存1-2周对抗体活性是没有影响的。 8)长期保存，加入叠氮纳，防止细菌污染。 一抗/二抗使用问题： 一抗、二抗的浓度一般要参照抗体说明书选择最适当的比例，一抗二抗的选择直接影响实验结果以及背景的深浅。要严格保证反应时间，洗膜要注意尽可能地将一抗二抗洗净，有利于降低背景;还要注意一抗二抗的匹配。 天然和非还原样品问题： 有些抗体只能识别的表位是非连续氨基酸，这些氨基酸虽然在蛋白质一级结构中彼此不连续，但是在空间结构中则是靠在一起的。这些抗体就只能识别靶蛋白的空间结构状态。对于这些样品，缓冲液和凝胶中就不能含有SDS,并且不能够对蛋白进行加热变性。
