如何避免 fitc的 红色荧光
5mmol#47。
(3)抗原对照?
参考见解。因未免疫动物的血清中无特异性抗体:标本直接滴加二抗:标本加同种动物的未免疫血清:最好是同一视野在未用荧光激发下进行对照:如果你做的是石蜡切片免疫组化，看是否非特异性染色，应呈阴性反应(1)你的二抗是用FITC标记的，目的是使DNA变性;2N盐酸需要使用，呈阴性反应，如果是用过氧化物酶做标记.0-9，为避免荧光分解，后者能使玻片透明，分装及荧光显微镜观察时均要避光，在加抗免疫球蛋白荧光抗体;L pH9，这个对照必须有。
做间接法免疫荧光染色，目的是看自发荧光，以PBS冲洗后，如何设置对照.5的碳酸氢盐缓冲液;
(3)关于免疫酶染色。
(2)阴性对照，脱蜡后直接在荧光显微镜下观察，就必须用3%H2O2以去除内源性过氧化物酶。
(1)空白对照，让Brdu抗体能够充分地与已经掺入的Brdu结合;
(2)封片最好用甘油加0
fitc荧光颜色
fitc荧光颜色黄绿色荧光橙红色荧光橙色荧光（一）荧光色素1.异硫氰酸荧光素（FITC）：呈现明亮的黄绿色荧光。2.四乙基罗丹明（RB200）：呈黄绿色荧光。。3.四甲基异硫氰酸罗丹明（TRITC）：呈橙红色荧光。4.藻红蛋白（R-RE）：呈明亮的橙色荧光。（二）其他荧光物质1.镧系螯合物：其中以Eu3＋应用最广。Eu3＋螯合物的激发光波长范围宽，发射光波长范围窄，荧光衰变时间长，最适合用于时间分辨荧光免疫测定。2.酶作用后产生荧光的物质：4-甲基伞酮-β-D半乳糖苷本身无荧光，受β-半乳糖苷酶的作用分解成4-甲基伞酮，后者可发出荧光。其他如碱性磷酸酶的底物是4-甲基伞酮磷酸盐，辣根过氧化物酶的底物是对羟基苯乙酸等。荧光色素许多物质都可产生荧光现象，但并非都可用作荧光色素。只有那些能产生明显的荧光并能作为染料使用的有机化合物才能称为免疫荧光色素或荧光染料。常用的荧光色素有：1.异硫氰酸荧光素（FITC）：为黄色或橙黄色结晶粉末，易溶于水或酒精等溶剂。分子量为389.4，最大吸收光波长为490～495nm，最大发射光波长520～530nm，呈现明亮的黄绿色荧光。其主要优点是：①人眼对黄绿色较为敏感；②通常切片标本中的绿色荧光少于红色。2.四乙基罗丹明（RB200）：为橘红色粉末，不溶于水，易溶于酒精和丙酮。性质稳定，可长期保存。最大吸收光波长为570nm，最大发射光波长为595～600nm，呈橘红色荧光。3.四甲基异硫氰酸罗丹明（TRITC）：最大吸引光波长为550nm，最大发射光波长为620nm，呈橙红色荧光。与FITC的翠绿色荧光对比鲜明，可配合用于双重标记或对比染色。其异硫氰基可与蛋白质结合，但荧光效率较低。4.藻红蛋白（R-RE）：本品为无定形，褐红色粉末，不溶于水，易溶于酒精和丙酮，性质稳定，可长期保存。最大吸引光波长为565nm，最大发射光波长为578nm，呈明亮的橙色荧光。与FITC的翠绿色荧光对比鲜明，故被广泛用于对比染色或用于两种不同颜色的荧光抗体的双重染色。其他荧光物质1.酶作用后产生荧光的物质：某些化合物本身无荧光效应，一旦经酶作用便形成具有强荧光的物质。例如4-甲基伞酮-β-D半乳糖苷，受β-半乳糖苷酶的作用分解成4-甲基伞酮，后者可发出荧光，激发光波长为360nm，发射光波长为450nm。其他如碱性磷酸酶的底物4-甲基伞酮磷酸盐和辣根过氧化物酶的底物对羟基苯乙酸等。2.镧系螯合物：某些3价稀土镧系元素如铕（Eu3+）、铽（Tb3+）、铈（Ce3+）等的螯合物经激发后也可发射特征性的荧光，其中以Eu3+应用最广。Eu3+螯合物的激发光波长范围宽，发射光波长范围窄，荧光衰变时间长，最适合用于分辨荧光免疫测定。
医学上的fitc是什么意思？
异硫氰酸荧光橙红，异硫氰酸荧光黄，异硫氰酸荧光红，异硫氰酸荧光素异构体I，5-异硫氰酸荧光素。其形态为黄色粉末，有吸湿性，是一种生化试剂，也是医学诊断药物，可对由地细菌病毒和寄生虫等所致疾病进行快速诊断。并且它能与各种抗体蛋白结合，结合后的抗体不丧失与一定抗原结合的特异性，并在碱性溶液中仍有强烈绿色荧光，加酸后析出沉淀，荧光消失，微溶于丙酮、乙醚和石油醚。系统命名法 3',6'-dihydroxy-5-isothiocyanato-3H-spiro[isobenzofuran-1,9'-xanthen]-3-one异硫氰酸化荧光素介绍异硫氰酸化荧光素为黄色粉末，能溶于水，在水中分解。易溶于碱性水溶液，并呈强列的绿色荧光消失，并析出沉淀，加碱后又溶解并出现荧光。难溶于丙酮，乙醚及石油醚。有吸湿性。是生化试剂,也是医学诊断药物,主要用于荧光抗体技术中的荧光染料,能和各种抗体蛋白结合,结合后的抗体不丧失与一定抗原结合的特异性,并在碱性溶液中具有强烈的绿色荧光。由4-硝基邻苯二甲酸酐（见C8H3NO5，[5466-84-2]）与间苯二酚在195-200℃反应10h，环合为3'-硝基荧光黄和4'-硝基荧光黄的混合物，再用乙酐乙酰化，加饱和氢氧化钠-乙醇溶液水解，得4'-硝基荧光素。然后将4'-硝基化荧光素溶解在氨水中，加雷氏镍及水合肼室温反应2h，还原为4'-氨基荧光素。最抬经酰化，消除得到异硫氰酸化荧光素。以上内容参考 百度百科-异硫氰酸化荧光素；百度百科-异硫氰酸荧光素
医学上的fitc是什么意思？
异硫氰酸荧光橙红，异硫氰酸荧光黄，异硫氰酸荧光红，异硫氰酸荧光素异构体I，5-异硫氰酸荧光素。其形态为黄色粉末，有吸湿性，是一种生化试剂，也是医学诊断药物，可对由地细菌病毒和寄生虫等所致疾病进行快速诊断。并且它能与各种抗体蛋白结合，结合后的抗体不丧失与一定抗原结合的特异性，并在碱性溶液中仍有强烈绿色荧光，加酸后析出沉淀，荧光消失，微溶于丙酮、乙醚和石油醚。系统命名法 3',6'-dihydroxy-5-isothiocyanato-3H-spiro[isobenzofuran-1,9'-xanthen]-3-one异硫氰酸化荧光素介绍异硫氰酸化荧光素为黄色粉末，能溶于水，在水中分解。易溶于碱性水溶液，并呈强列的绿色荧光消失，并析出沉淀，加碱后又溶解并出现荧光。难溶于丙酮，乙醚及石油醚。有吸湿性。是生化试剂,也是医学诊断药物,主要用于荧光抗体技术中的荧光染料,能和各种抗体蛋白结合,结合后的抗体不丧失与一定抗原结合的特异性,并在碱性溶液中具有强烈的绿色荧光。由4-硝基邻苯二甲酸酐（见C8H3NO5，[5466-84-2]）与间苯二酚在195-200℃反应10h，环合为3'-硝基荧光黄和4'-硝基荧光黄的混合物，再用乙酐乙酰化，加饱和氢氧化钠-乙醇溶液水解，得4'-硝基荧光素。然后将4'-硝基化荧光素溶解在氨水中，加雷氏镍及水合肼室温反应2h，还原为4'-氨基荧光素。最抬经酰化，消除得到异硫氰酸化荧光素。以上内容参考 百度百科-异硫氰酸化荧光素；百度百科-异硫氰酸荧光素
FITC在酸性条件下有荧光吗
FITC在酸性条件下有荧光。DAPI和FITC标记的荧光抗体可以同时在荧光显微镜下观察到DAPI能快速进入活细胞中与DNA结合，因此DAPI对生物体而言，也被视为一种毒性物质与致癌物。CM-Dil是标记细胞膜的，而DAPI是标记细胞核的可以是活细胞，一人做兔子的膀胱肿瘤，他说在14天的时候很强，21天的时候比较弱，再长的时间就没有检测过。物质概况在吸收紫外线或可见光后，能把短波长的光转变为波长较长的可见光波而反射出来，呈闪亮的鲜艳色彩。例如，酸性曙红、荧光黄、红汞以及某些分散染料等。它们大多是含有苯环或杂环并带有共轭双键的化合物。荧光染料可以单独使用，也可以组合成复合荧光染料使用。其中复合荧光染料是利用荧光共振能量转移技术合成的荧光染料，由距离非常近、能量可以在彼此间传递的一个供体及一个受体荧光物分子所组成。
异硫氰酸荧光素的其他资料
（fluorescein isothiocyanate， FITC） FITC纯品为黄色或橙黄色结晶粉末，易溶于水和酒精溶剂。有两种异构体，其中异构体Ⅰ型在效率、稳定性与蛋白质结合力等方面都更优良。FITC分子量为389.4，最大吸收光波长为490～495nm，最大发射光波长为520～530nm，呈现明亮的黄绿色荧光。FITC在冷暗干燥处可保存多年，是目前应用最广泛的荧光素。其主要优点是人眼对黄绿色较为敏感，通常切片标本中的绿色荧光少于红色。
双标记法荧光抗体技术的主要用途是
双标记法荧光抗体技术的主要用途是：可同时检测同一标本中两种抗原双重标记实验用于检测同一细胞内两种不同抗原。该方法应用两种不同荧光染料标记的抗体分别检测不同抗原。由于在同一个样本使用两种染料，为此就要求每一种检测试剂仅能识别一种抗原。有3种方法能够达到这一目的。 最确定的方法是直接标记一抗。双重标记实验用于检测同一细胞内两种不同抗原。该方法应用两种不同荧光染料标记的抗体分别检测不同抗原。由于在同一个样本使用两种染料，为此就要求每一种检测试剂仅能识别一种抗原。有3种方法能够达到这一目的。 最确定的方法是直接标记一抗。例如，当应用针对不同抗原的两种特异性纯化单抗时，将其中一种标记FITC，另一种标记Texas红。只要这两种单抗本身适合进行荧光标记，一般均会得到满意的结果。用于标记的抗体，要求是高特异性和高亲和力的。所用抗血清中不应含有针对标本中正常组织的抗体。一般需经纯化提取IgG后再作标记。作为标记的荧光素应符合以下要求：①应具有能与蛋白质分子形成共价健的化学基团，与蛋白质结合后不易解离，而未结合的色素及其降解产物易于清除。②荧光效率高，与蛋白质结合后，仍能保持较高的荧光效率。③荧光色泽与背景组织的色泽对比鲜明。④与蛋白质结合后不影响蛋白质原有的生化与免疫性质。⑤标记方法简单、安全无毒。⑥与蛋白质的结合物稳定，易于保存。
常用的荧光素主要有哪些
目前常用于标记抗体的荧光素有以下几种：异硫氰酸荧光素，四乙基罗丹明，四甲基异硫氰酸罗丹明，酶作用后产生荧光的物质。荧光素是具有光致荧光特性的染料，荧光染料种类很多。荧光素也就是fda。fda可透过细胞膜并作为荧光素积蓄在活细胞内。由于荧光素较bcecf或calcein的亲水性低，因此荧光素从细胞中渗漏的量也高。fda也可用于流式细胞仪。荧光素的激发和发射波长分别为488nm和530nm。扩展资料：间苯二酚加热至150℃，使之全部熔融，边搅拌边加入理论量的邻苯二甲酸酐，混匀并熔融后升温至185℃，保温半小时，然后慢慢加入适量新焙烧的无水氯化锌，当完全溶解后，逐渐升温至210～215℃。整个过程均需不停地搅拌，当反应液开始变稠时，停止搅拌，继续在此温度下加热至完全固化，研碎后得粉状粗品。将粉状粗品与稀盐酸混合加热煮沸，以浸出氯化锌和剩余的间苯二酚，抽滤后水洗、干燥，再用乙醇提取，晾干后即得红色固体荧光素。
