有谁用过Qiagen凯杰(进口),天根,BIOG的DNA提取试剂盒吗?能不能分析一下各自优缺点?
有人用天根的植物RNA提取试剂盒提取过RNA
提RNA一般注意:提取前材料的保存(新鲜材料,过夜处理的样品),提取中对外源性的RNA酶的清除控制(离心管,PCR管,电泳槽,台面等的无RNA酶化处理),提取后需要-80度保存.其次跑电泳时,注意电泳液最好用新鲜的,核酸染料等诸多因素.
细菌总RNA提取试剂盒( germs islation kit).
对于外源性RNA酶的控制外源RNA酶清除剂,避免使用致癌物DEPC的危险方法就可简单操作清除耗材,台面,仪器等的外源RNA酶的降解作用.
有没有用过真菌DNA提取试剂盒的
1..Biospin Fungus Genomic DNAExtraction KitBiospin 真菌基因组DNA 提取试剂盒Cat# BSC14S1(附有说明书)2.omega 真菌DNA大量提取试剂盒B15206 D3690-01 E.Z.N.A. TM Fungal DNA Maxi Kit (5) 740.00本人使用的是这个,效率比较好,价钱也比较合理。3.ZR Fungal/Bacterial DNA Kit�6�4ZR Fungal/Bacterial DNA Kit�6�4Simple, rapid isolation of PCR-quality DNA from tough-to-lyse fungi and bacteria. D6005 50 preps. 1584.00
有用过QIAGEN提取植物DNA的试剂盒的吗
植物DNA提取方法
方法一:
1.取两片幼嫩新鲜叶片,置于预冷的研钵中,倒入适量液氮,迅速研磨成粉末状,随后加入3ml预热的2%CTAB抽提缓冲液和50ul抗氧化剂2-巯基乙醇,继续研磨成略有流动性的糊状或粥状,转入1.5ml的离心管中,于65℃水浴锅中保温约60min。
2.待混合物冷却至室温后加入等600ul的CI(氯仿:异戊醇=24:1)溶液混匀,轻轻颠倒离心管几次使管内混合物成乳浊液,常温下10000rpm离心10min,取上清液转入另一干净的离心管中。
3.重复步骤(2)一次。
4.取步骤(3)上清液加入2.5倍体积无水乙醇,仔细混匀,-20冰箱30min以上,沉淀DNA 4℃,12000rpm离心10min。
5.弃去上层有机溶剂,加500ul75%乙醇洗涤沉淀,4℃下8000rpm离心5min,弃去上清,洗涤沉淀3次。
6.倒置或者37度培养箱烘干。
7.加50ulTE缓冲液溶解DNA,于-20℃冷藏备用。
方法二:
1. 在50ml离心管中加入20ml提取缓冲液Ⅰ, 60℃水浴预热。
2. 植物5-10g, 剪碎, 在研钵中加液氮磨成粉状后立即倒入预热的离心管中, 剧烈摇动混匀, 60℃水浴保温30-60分钟(时间长,DNA产量高), 不时摇动。
3. 加入20ml氯仿/戊醇/乙醇溶液, 颠倒混匀(需带手套, 防止损伤皮肤),室温下静置5-10分钟, 使水相和有机相分层(必要时可重新混匀)。
4. 室温下5000rpm离心5分钟。
5. 仔细移取上清液至另一50ml离心管,加入1倍体积异丙醇,混匀,室温下放置片刻即出现絮状DNA沉淀。
6. 在1.5mleppendorf中加入1ml TE。用钩状玻璃棒捞出DNA絮团,在干净吸水纸上吸干,转入含TE的离心管中,DNA很快溶解于TE。
7. 如DNA不形成絮状沉淀,则可用5000rpm离心5分钟, 再将沉淀移入TE管中。这样收集的沉淀,往往难溶解于TE,可在60℃水浴放置15分钟以上,以帮助溶解。
8. 将DNA溶液3000rpm离心5分钟,上清液倒入干净的5ml离心管。
9. 加入5μlRNaseA(10μg/μl), 37℃ 10分钟, 除去RNA(RNA对DNA的操作、分析一般无影响,可省略该步骤)。
10. 加入1/10体积的3mol/L NaAc及2×体积的冰乙醇,混匀,-20℃放置20分钟左右,DNA形成絮状沉淀。
11. 用玻棒捞出DNA沉淀,70%乙醇漂洗,再在干净吸水纸上吸干。
12. 将DNA重溶解于1ml TE, -20贮存。
13. 取2μlDNA样品在0.7% Agarose胶上电泳, 检测DNA的分子大小。同时取15μl稀释20倍, 测定OD260/OD280, 检测DNA含量及质量。
方法三:
植物DNA的SDS提取法:
试验试剂:
1、研磨缓冲液:称取59.63gNaCl,13.25g柠檬酸三钠,37.2gEDTA-Na分别溶解后合并为一,用0.2mol/L的NaOH调至pH7.0,并定容至1000ml。
2、10×SSC溶液:称取87.66gNaCl和44.12g柠檬酸三钠,分别溶解,一起定容至1000ml。
3、1×SSC溶液:用10×SSC溶液稀释10倍。
4、0.1×SSC溶液:用1×SSC溶液稀释10倍。
5、Rnase溶液:用0.14mol/LNaCl溶液配制成25mg/ml的酶液,用1mol/LHCl,pH至5.0,使用前经80℃水浴处理5min(以破坏可能存在的Dnase)。
6、氯仿-异戊醇:按24ml氯仿和1ml异戊醇混合。
7、5mol/L高氯酸钠溶液:称取NaClO4·H2O 70.23g,先加入少量蒸馏水溶解再容至100ml。
8、SDS(十二烷基硫酸钠)化学试剂的重结晶:将SDS放入无水酒精中达到饱和为止,然后在70~80℃的水浴中溶解,趁热过滤,冷却之后即将滤液放入冰箱,待结晶出现再置室温下凉干待用。
9、1mol/LHCl。
10、0.2mol/LNaOH。
11、二苯胺乙醛试剂:1.5g二苯胺溶于100ml冰醋酸中,添加1.5ml浓硫酸,装入棕色瓶,贮存暗处,使用时加0.1ml乙醛液〔浓乙醛:H2O=1:50(V/V)〕。
12、1.0mol/L高酸溶液(HClO4)。
13、0.05mol/LNaOH。
14、DNA标准液:取标准DNA25mg溶于少量0.05mol.L-1NaOH中,再用0.05mol/LNaOH定容至25ml,后用移溶管吸取此液5ml至50ml容量瓶中,加5.0ml1mol/LHClO4,混合冷却后用0.5mol/LHClO4定容至刻度,则得100μg/ml的标准溶液。
什么是理工学科?
一、理工学科是一个广大的领域包含物理、化学、生物、工程、天文、数学及前面六大类的各种运用与组合。理工事实上是自然、科学、和科技的容合。
二、理工科专业分为理、工、农、医四个学科门类,各学科专业设置如下:
(一)、理学
1. 数学类 :数学与应用数学;信息与计算科学
2. 物理学类:物理学;应用物理学
3.化学:化学;应用化学
4. 生物科学类:生物科学;生物技术
5.天文学类:天文学
6. 地质学类:地质学;地球化学
7. 地理科学类:地理科学;资源环境与城乡规划管理;地理信息系统
8. 地球物理学类:地球物理学
9. 大气科学类:海洋科学;应用气象学
10. 海洋科学类:海洋科学;海洋技术
11. 力学类:理论与应用力学
12. 电子信息科学类:电子信息科学与技术;微电子学;光信息科学与技术
13. 材料科学类:材料物理;材料化学
14. 环境科学类:环境科学;生态学
15. 心理学类:心理学;应用心理学
16. 统计学类:统计学
(二)、工学
1. 地矿类:采矿工程;石油工程;矿物加工工程;勘查技术与工程;资源勘查工程
2. 材料类:冶金工程;金属材料工程;无机非金属材料工程;高分子材料与工程
3. 机械类:机械设计制造及其自动化;材料成型及控制工程;工业设计;过程装备与控制工程
4.仪器仪表类:测控技术与仪器
5. 能源动力类:核工程与核技术
6. 电气信息类:电气工程及其自动化;自动化;电子信息工程;通信工程;计算机科学与技术;生物医学工程
7. 土建类:建筑学;城市规划;土木工程;建筑环境与设备工程;给水排水工程
8. 水利类:水利水电工程;水文与水资源工程;港口航道与海岸工程
9. 测绘类:测绘工程
10. 环境与安全类:环境工程;安全工程
11. 化工与制药类:化学工程与工艺;制药工程
12. 交通运输类:交通运输;交通工程;油气储运工程;飞行技术;航海技术;轮机工程
13. 海洋工程类:船舶与海洋工程
14. 轻工纺织食品类:食品科学与工程;轻化工程;包装工程;印刷工程;纺织工程;服装设计与工程
15. 航空航天类:飞行器设计与工程;飞行器动力工程;飞行器制造工程;飞行器环境与生命保障工程
16. 武器类:武器系统与发射工程;探测制导与控制技术;弹药工程与爆炸技术;特种能源工程与烟火技术;地面武器机动工程;信息对抗技术
17. 工程力学类:工程力学
18. 生物工程类:生物工程
19. 农业工程类:农业机械化及其自动化;农业电气化与自动化;农业建筑环境与能源工程;农业水利工程
20. 林业工程类:森林工程;木材科学与工程;林产化工
21. 公安技术类:刑事科学技术;消防工程
(三)、农学
1. 植物生产类:农学;园艺;植物保护;茶学
2. 草业科学类:草业科学
3. 森林资源类:林学;森林资源保护与游憩;野生动物与自然保护区管理
4. 环境生态类:园林;水土保持与荒漠化防治;农业资源与环境
5. 动物生产类:动物科学:蚕学
6. 动物医学类:动物医学
7. 水产类:水产养殖学;海洋渔业科学与技术
(四)、医学
1. 基础医学类:基础医学
2. 预防医学类:预防医学
3. 临床医学与医学技术类:临床医学;麻醉学;医学影像学;医学检验
4. 口腔医学类:口腔医学
5. 中医学类:中医学;针灸推拿学;蒙医学;藏医学
6. 法医学类:法医学
7. 护理学类:护理学
8. 药学类:药学;中药学;药物制剂
DNA提取试剂盒的使用方法
●操作方法
操作流程见图1,全套操作约需1小时,分匀浆、细胞裂解、除蛋白、DNA纯化等步骤,详细说明如下:
1. 匀浆和细胞裂解。
使用不同的实验材料需采用不同的匀浆步骤,具体说明如下:
【从动物组织中提取基因组DNA】
◆使用研钵进行匀浆时:
① 取1~100 mg的动物组织或人组织移入冰浴预冷的研钵中,快速用力展研成匀浆。
注)下列组织请加液氮研磨至粉末状。
A.富含DNA酶的胰脏、脾脏、胸腺、淋巴等组织。
B.富含胶原蛋白的皮肤、肌腱等组织。
C.富含角质蛋白的组织或坚硬的组织(如骨骼)等。
② 加入650 μl的Solution A和0.9 μl的RNase A1,温和研磨30秒钟。
注)使用上述①-注)的实验材料时,请在加入Solution A及RNase A1后,将研钵置于65℃水浴上研磨1分钟。
③ 收集650 μl研磨好的组织匀浆液移至Collection Tube中。如果匀浆体积不足650 μl,请补充Solution A至650 μl,65℃保温5分钟。
◆使用研磨棒进行匀浆时:
① 取1~100 mg的动物组织或人组织移入冰浴预冷的Collection Tube 中,用研磨棒快速研磨成糊状。
② 加入350 μl的Solution A和0.9 μl的RNase A1后用研磨棒快速研磨成匀浆。
③ 加入350 μl的Solution A将研磨棒上的匀浆冲入Collection Tube中,充分振荡混合后,65℃保温5分钟。
【从植物材料或植物培养细胞中提取基因组DNA】
① 按下表称取适量的新鲜植物材料(如选用的是冷冻干燥植物材料,则用量减半),剪成小块放入研钵中,加入液氮,待样品冷冻完全后快速、用力研磨至粉末状。研磨时应间断加入液氮以防止材料融化。
植物材料种类
植物材料使用量*
植物花、叶片
10~100 mg
植物茎
60~240 mg
植物根
80~240 mg
植物种子
80~240 mg
* 如选取植物的根、种子等样品时,因其基因组DNA含量很低,需使用超过表格中所示的参数用量,此时请分两管进行步骤1~6的实验操作,在步骤7的操作中再将各管溶液分次加入至同一Spin Column中过滤,使各管的基因组DNA结合到同一个Spin Column上。
如从培养的植物细胞中提取基因组DNA,请离心收集2×103~1×107的培养植物细胞,加入150 μl水充分悬浮细胞后移入研钵中,加入液氮后快速、用力研磨至粉末状。
注)样品研磨应充分,否则将会严重影响基因组DNA的收率。
② 将研钵移至65℃水浴,当样品粉末刚开始融化时,向研钵中加入700 μl的Solution A和1.2 μl的RNase A1,用力碾磨30秒。
③ 收集650 μl研磨好的组织匀浆移至Collection Tube中。如匀浆体积不足650 μl,请补充Solution A至650 μl。65℃保温15分钟。
注)处理富含纤维的根/茎等植物材料或富含淀粉、蛋白质的种子等时,可延长水浴时间至60分钟。
【从全血中提取基因组DNA】
① 取10~250 μl的全血(含抗凝剂)加入至Collection Tube中。
② 加入500 μl的Solution A。
③ 加入1 μl的RNase A1,激烈振荡15秒钟后,冰浴5分钟。
注) 人与动物的抗凝全血的一次处理量为≤250 μl;禽类、两栖类的抗凝全血的一次处理量为≤10 μl。
【从培养细胞中提取基因组DNA】
◆使用悬浮培养的动物细胞时:
① 使用Collection Tube收集1×105~1.5×107的细胞悬浮液,5,000 rpm离心5分钟,弃上清(细胞培养液)。
② 加入150 μl的灭菌蒸馏水或PBS悬浮细胞。
③ 加入500 μl的Solution A和0.8 μl的RNase A1,激烈振荡15秒钟,然后室温静置1分钟。
◆使用贴壁细胞时:
① 弃尽培养液,向培养皿中加入650 μl的Solution A,室温静置1分钟。
注)96孔板等的每个孔中一次容纳不了650 μl 溶液时,请分数次处理细胞。
② 用移液枪的枪头吹落贴壁培养细胞,取650 μl的细胞悬浮液转移至Collection Tube中。
③ 加入0.8 μl的RNase A1,激烈振荡15秒钟,然后室温静置1分钟。
2. 加入400 μl的Solution B,振荡混合。
3. 加入1 ml的4℃预冷的Solution C,充分混匀后,12,000 rpm离心2分钟。
4. 弃去上层有机相,再加入1 ml的4℃预冷的Solution C,充分混匀后,12,000 rpm离心2分钟。
5. 弃去上层有机相,然后将水相溶液(无色下层)转移至置于Collection Tube上的Filter Cup中,12,000 rpm离心1分钟。
注)有机相(上层)带有颜色,请务必除尽,否则会阻碍DNA结合到DNA制备膜上。相间沉淀不必考虑,在过滤时将被去除。
6. 弃Filter Cup,在滤液中加入400 μl的DB Buffer,混合均匀。
7. 将试剂盒中的Spin Column安置于Collection Tube上。将上述操作6混合溶液转移至Spin Column中,12,000 rpm离心1分钟,弃滤液。
8. 将500 μl的Rinse A加入至Spin Column中,12,000 rpm离心30秒钟,弃滤液。
9. 将700 μl的Rinse B加入至Spin Column中,12,000 rpm离心30秒钟,弃滤液。
注)请沿Spin Column管壁四周加入Rinse B,这样有助于完全冲洗沾附于管壁上的盐份。
10. 重复操作步骤9。
11. 将Spin Column安置于新的1.5 ml的离心管上,在Spin Column膜的中央处加入50~200 μl的灭菌蒸馏水或Elution Buffer,室温静置1分钟。
注)把灭菌蒸馏水或Elution Buffer加热至65℃使用时有利于提高洗脱效率。
12. 12, 000 rpm离心1分钟洗脱DNA。
如果实验室备有适合于Spin Column接口的负压装置,可从上述操作步骤6完成以后进行以下操作。
7. 将试剂盒中的Spin Column插到负压装置的插口上,将上述操作步骤6的混合溶液转移到Spin Column中,开启调节负压装置,缓慢吸走Spin Column中的溶液(流速控制在1滴/秒)。
8. 将负压调至最大,向Spin Column中加入500 μl的Rinse A,吸尽Spin Column中溶液。
9. 向Spin Column中加入700 μl的Rinse B,吸尽Spin Column中溶液。
注)请沿Spin Column管壁四周加入Rinse B,这样有助于完全冲洗沾附于管壁上的盐份。
10. 重复操作步骤9。然后从负压装置上取下Spin Column,将其安置于试剂盒中的Collection Tube上,12, 000 rpm离心1分钟。
11. 将Spin Column安置于新的1.5 ml的离心管上,在Spin Column膜的中央处加入50~200 μl的灭菌蒸馏水或Elution Buffer,室温静置1分钟。
注)把灭菌蒸馏水或Elution Buffer加热至65℃使用时有利于提高洗脱效率。
12. 12, 000 rpm离心1分钟洗脱DNA。
DNA提取试剂盒的操作方法
全套操作约需1小时,分匀浆、细胞裂解、除蛋白、DNA纯化等步骤,详细说明如下。匀浆和细胞裂解:使用不同的实验材料需采用不同的匀浆步骤,具体说明如下:【从动物组织中提取基因组DNA】使用研钵进行匀浆时:① 取1~100 mg的动物组织或人组织移入冰浴预冷的研钵中,快速用力展研成匀浆。注)下列组织请加液氮研磨至粉末状。A.富含DNA酶的胰脏、脾脏、胸腺、淋巴等组织。B.富含胶原蛋白的皮肤、肌腱等组织。C.富含角质蛋白的组织或坚硬的组织(如骨骼)等。② 加入650 μl的Solution A和0.9 μl的RNase A1,温和研磨30秒钟。注)使用上述①-注)的实验材料时,请在加入Solution A及RNase A1后,将研钵置于65℃水浴上研磨1分钟。③ 收集650 μl研磨好的组织匀浆液移至Collection Tube中。如果匀浆体积不足650 μl,请补充Solution A至650 μl,65℃保温5分钟。使用研磨棒进行匀浆时:① 取1~100 mg的动物组织或人组织移入冰浴预冷的Collection Tube 中,用研磨棒快速研磨成糊状。② 加入350 μl的Solution A和0.9 μl的RNase A1后用研磨棒快速研磨成匀浆。③ 加入350 μl的Solution A将研磨棒上的匀浆冲入Collection Tube中,充分振荡混合后,65℃保温5分钟。【从植物材料或植物培养细胞中提取基因组DNA】① 按下表称取适量的新鲜植物材料(如选用的是冷冻干燥植物材料,则用量减半),剪成小块放入研钵中,加入液氮,待样品冷冻完全后快速、用力研磨至粉末状。研磨时应间断加入液氮以防止材料融化。植物材料种类植物材料使用量*植物花、叶片10~100 mg植物茎60~240 mg植物根80~240 mg植物种子80~240 mg* 如选取植物的根、种子等样品时,因其基因组DNA含量很低,需使用超过表格中所示的参数用量,此时请分两管进行步骤1~6的实验操作,在步骤7的操作中再将各管溶液分次加入至同一Spin Column中过滤,使各管的基因组DNA结合到同一个Spin Column上。如从培养的植物细胞中提取基因组DNA,请离心收集2×103~1×107的培养植物细胞,加入150 μl水充分悬浮细胞后移入研钵中,加入液氮后快速、用力研磨至粉末状。注)样品研磨应充分,否则将会严重影响基因组DNA的收率。② 将研钵移至65℃水浴,当样品粉末刚开始融化时,向研钵中加入700 μl的Solution A和1.2 μl的RNase A1,用力碾磨30秒。③ 收集650 μl研磨好的组织匀浆移至Collection Tube中。如匀浆体积不足650 μl,请补充Solution A至650 μl。65℃保温15分钟。注)处理富含纤维的根/茎等植物材料或富含淀粉、蛋白质的种子等时,可延长水浴时间至60分钟。【从全血中提取基因组DNA】① 取10~250 μl的全血(含抗凝剂)加入至Collection Tube中。② 加入500 μl的Solution A。③ 加入1 μl的RNase A1,激烈振荡15秒钟后,冰浴5分钟。注) 人与动物的抗凝全血的一次处理量为≤250 μl;禽类、两栖类的抗凝全血的一次处理量为≤10 μl。【从培养细胞中提取基因组DNA】三.使用悬浮培养的动物细胞时:① 使用Collection Tube收集1×105~1.5×107的细胞悬浮液,5,000 rpm离心5分钟,弃上清(细胞培养液)。② 加入150 μl的灭菌蒸馏水或PBS悬浮细胞。③ 加入500 μl的Solution A和0.8 μl的RNase A1,激烈振荡15秒钟,然后室温静置1分钟。四.使用贴壁细胞时:① 弃尽培养液,向培养皿中加入650 μl的Solution A,室温静置1分钟。注)96孔板等的每个孔中一次容纳不了650 μl 溶液时,请分数次处理细胞。② 用移液枪的枪头吹落贴壁培养细胞,取650 μl的细胞悬浮液转移至Collection Tube中。③ 加入0.8 μl的RNase A1,激烈振荡15秒钟,然后室温静置1分钟。2. 加入400 μl的Solution B,振荡混合。3. 加入1 ml的4℃预冷的Solution C,充分混匀后,12,000 rpm离心2分钟。4. 弃去上层有机相,再加入1 ml的4℃预冷的Solution C,充分混匀后,12,000 rpm离心2分钟。5. 弃去上层有机相,然后将水相溶液(无色下层)转移至置于Collection Tube上的Filter Cup中,12,000 rpm离心1分钟。注)有机相(上层)带有颜色,请务必除尽,否则会阻碍DNA结合到DNA制备膜上。相间沉淀不必考虑,在过滤时将被去除。6. 弃Filter Cup,在滤液中加入400 μl的DB Buffer,混合均匀。7. 将试剂盒中的Spin Column安置于Collection Tube上。将上述操作6混合溶液转移至Spin Column中,12,000 rpm离心1分钟,弃滤液。8. 将500 μl的Rinse A加入至Spin Column中,12,000 rpm离心30秒钟,弃滤液。9. 将700 μl的Rinse B加入至Spin Column中,12,000 rpm离心30秒钟,弃滤液。注)请沿Spin Column管壁四周加入Rinse B,这样有助于完全冲洗沾附于管壁上的盐份。10. 重复操作步骤9。11. 将Spin Column安置于新的1.5 ml的离心管上,在Spin Column膜的中央处加入50~200 μl的灭菌蒸馏水或Elution Buffer,室温静置1分钟。注)把灭菌蒸馏水或Elution Buffer加热至65℃使用时有利于提高洗脱效率。12. 12, 000 rpm离心1分钟洗脱DNA。如果实验室备有适合于Spin Column接口的负压装置,可从上述操作步骤6完成以后进行以下操作。7. 将试剂盒中的Spin Column插到负压装置的插口上,将上述操作步骤6的混合溶液转移到Spin Column中,开启调节负压装置,缓慢吸走Spin Column中的溶液(流速控制在1滴/秒)。8. 将负压调至最大,向Spin Column中加入500 μl的Rinse A,吸尽Spin Column中溶液。9. 向Spin Column中加入700 μl的Rinse B,吸尽Spin Column中溶液。注)请沿Spin Column管壁四周加入Rinse B,这样有助于完全冲洗沾附于管壁上的盐份。10. 重复操作步骤9。然后从负压装置上取下Spin Column,将其安置于试剂盒中的Collection Tube上,12, 000 rpm离心1分钟。11. 将Spin Column安置于新的1.5 ml的离心管上,在Spin Column膜的中央处加入50~200 μl的灭菌蒸馏水或Elution Buffer,室温静置1分钟。注)把灭菌蒸馏水或Elution Buffer加热至65℃使用时有利于提高洗脱效率。12. 12, 000 rpm离心1分钟洗脱DNA。
求助QIAGEN试剂盒提取总RNA的步骤
植物材料
用最精确的方法,称取不超过100mg的植物材料,置于处理过的研钵,加入液氮进行研磨
将研磨得到的粉末,快速转移至无RNase,并经过液氮冷却的2mL离心管(自备),注意材料要保持冷冻状态
加入450µL Buffer RLT(1mL 加入10μL β-巯基乙醇),颠倒混匀,涡旋
将溶解物转移至于淡紫色的QIAshredder spin column,最大转速离心2分钟,取上清转移至新的2mL的收集管(自备)
加0.5倍体积(约225μL)的无水乙醇,迅速吹打混匀
将样品(约650μL )转移至带有2mL回收管的粉色RNeasy spin column(以下简称column),>=8000g离心15s,将滤出物丢弃
加入700µL Buffer RW1至column,>=8000g离心15s清洗柱子上的滤膜,丢弃滤出物和收集管
转移column至新的收集管(提供),加入500 µL Buffer RPE,>=8000g离心15s清洗柱子上的滤膜,丢弃滤出物
再加入500µL Buffer RPE,>=8000g离心2分钟清洗柱子上的滤膜
(为了保证除净Buffer RPE,可弃旧的收集管和滤出物,取新收集管(自备)
最大转速离心1分钟)
转移RNeasy spin column至1.5mL收集管(提供),加入30-50µl 无RNA酶的水于滤膜上,>=8000g离心1分钟,洗脱RNA
(如果预期得到的RNA大于20µg,可重复第十步)
或者看说明书最好了
求助QIAGEN试剂盒提取总RNA的步骤
总RNA提取试剂盒步骤:
样品处理:
a. 植物组织:取新鲜或-70℃冻存100mg组织在液氮中研磨,把粉末加入到1ml裂解液中混匀。
b. 动物组织:取新鲜或-70℃冻存100mg组织加1ml裂解液,用组织研磨杵或匀浆器匀浆处理。
c. 贴壁细胞:直接在培养板中加入裂解液裂解细胞,每106细胞加1ml 裂解液。用取样器吹打混匀。
d. 细胞悬液:离心收集细胞。每106动物、植物和酵母细胞或每107细菌细胞加1ml裂解液混匀。
e. 血液处理:取0.2-1ml新鲜血液加3倍体积红细胞裂解液,混匀后室温放置10分钟,10000rpm离心1分钟。弃上清,若沉淀含有红细胞,可加入2倍体积红细胞裂解液重复裂解步骤。离心后沉淀加入1 ml裂解液混匀。
将处理后的样品在室温放置5分钟,使得核酸蛋白复合物完全分离。
向匀浆样品中加0.2ml氯仿,盖好管盖,剧烈振荡15秒,室温放置3-5分钟。
2-8℃ 12000 rpm离心10分钟。RNA主要在上层无色的水相中,把水相转移到新管中,不要吸到沉淀。
吸附柱前处理:在吸附柱中加入500ul 洗柱液,室温放置2分钟,2-8℃ 12,000 rpm离心2min,弃废液。
第4步收集的上清中加入200ul无水乙醇混匀,加入吸附柱静置2分钟,2-8℃ 12000rpm离心2min,弃废液。
向吸附柱中加入600ul漂洗液(使用前请先检查是否已加入无水乙醇),2-8℃ 12,000 rpm离心2min,弃废液。
向吸附柱中加入600ul漂洗液,2-8℃ 12,000 rpm离心2min,弃废液。
12000rpm离心2min,弃掉收集管,将吸附柱置于室温放置数分钟将吸附柱中残余的漂洗液去除。
将吸附柱放入新管中,向膜中央滴加50-100ul RNase free ddH2O,室温放置5min,12000rpm室温离心2min即得到RNA。
血清是什么?
血液凝固后,在血浆中除去纤维蛋白原及某些凝血因子后分离出的淡黄色透明液体或指纤维蛋白原已被除去的血浆。其主要作用是提供基本营养物质、提供激素和各种生长因子、提供结合蛋白、提供促接触和生长因子使细胞贴壁免受机械损伤、对培养中的细胞起到某些保护作用。血浆除去纤维蛋白原后的胶状液体。每100ml人血清含有蛋白质6—8g,其中主要是白蛋白和球蛋白。血清不会凝固。有免疫,维持酸碱平衡和渗透压的作用,血清蛋白质亦可储备供给机体蛋白质不足时的应用。人和动物的血清常用以进行各种血清学试验,帮助诊断疾病。含抗体的血清可作为预防或治疗疾病之用。扩展资料:血清是由血浆去除纤维蛋白原而形成的一种很复杂的混合物,其组成成份虽大部分已知,但还有一部分尚不清楚,且血清组成及含量常随供血动物的性别、年龄、生理条件和营养条件不同而异。血清是血浆中不含纤维蛋白原的胶状液体,具有维持血液的正常粘度、酸碱度、渗透压等作用。它主要由水和各种化学成分组成,这些化学成分包括白蛋白、α1、α2、β、γ-球蛋白,甘油三酯,总胆固醇,谷丙转氨酶等。血清中含有各种血浆蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生长因子、激素、无机物等,这些物质对促进细胞生长或抑制生长活性是达到生理平衡的。对血清的成分和作用的研究虽有很大进展,但仍存在一些问题。参考资料:百度百科—血清