PCR引物浓度一般选多少
PCR引物浓度一般选5～20μmol/L。PCR反应五要素：参加PCR反应的物质主要有五种即：引物(PCR引物为DNA片段，细胞内DNA复制的引物为一段RNA链）、酶、dNTP、模板和缓冲液（其中需要Mg2+）。引物有多种设计方法，由PCR在实验中的目的决定，但基本原则相同。PCR所用的酶主要有两种来源：Taq和Pfu，分别来自两种不同的噬热菌。其中Taq扩增效率高但易发生错配。Pfu扩增效率弱但有纠错功能。所以实际使用时根据需要必须做不同的选择。模板即扩增用的DNA，可以是任何来源，但有两个原则，第一纯度必须较高，第二浓度不能太高以免抑制。缓冲液的成分最为复杂，除水外一般包括四个有效成分：缓冲体系，一般使用HEPES或MOPS缓冲体系；一价阳离子，一般采用钾离子，但在特殊情况下也可使用铵根离子；二价阳离子，即镁离子。扩展资料PCR技术的基本原理类似于DNA的天然复制过程，其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。PCR由变性-退火-延伸三个基本反应步骤构成：①模板DNA的变性：模板DNA经加热至93℃左右一定时间后，使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离，使之成为单链，以便它与引物结合，为下轮反应作准备；②模板DNA与引物的退火（复性）：模板DNA经加热变性成单链后，温度降至55℃左右，引物与模板DNA单链的互补序列配对结合；③引物的延伸：DNA模板-引物结合物在72℃、DNA聚合酶（如TaqDNA聚合酶）的作用下，以dNTP为反应原料，靶序列为模板，按碱基互补配对与半保留复制原理，合成一条新的与模板DNA链互补的半保留复制链，重复循环变性-退火-延伸三过程就可获得更多的“半保留复制链”。而且这种新链又可成为下次循环的模板。每完成一个循环需2～4分钟，2～3小时就能将待扩目的基因扩增放大几百万倍。 参考资料来源：百度百科-引物
PCR扩增何时要引物?何时不要引物?
亲，你好，我是唐娜老师，很高兴为你解答。PCR扩增实验中，引物是必须的，而不是可选的。PCR是通过引物（Primers）选择性地扩增目标DNA序列的一种方法。引物是DNA的短片段，能与待扩增序列的两个端点互补配对。在PCR反应过程中，引物与待扩增的DNA序列结合，并作为DNA合成的起始点，引导DNA聚合酶进行DNA链的合成。引物的设计要求：- 引物的长度通常在18-30个碱基对之间，一般为20个碱基对；- 引物的GC含量应在40%-60%之间；- 引物的互补端应该避免内在的碱嘌呤（G或A）序列，以防止引物内部的二聚体形成，影响扩增。在PCR反应中，每个反应体系都需要两个引物，一个是正向引物（Forward primer），另一个是反向引物（Reverse primer）。正向引物和反向引物在扩增目标序列两端互补配对，使PCR反应能够特异性地扩增目标序列。在常规PCR扩增中，引物必须存在才能进行扩增。没有合适的引物，无法选择性地扩增目标序列。需要注意的是，在一些特殊的PCR反应中，如反向转录PCR（RT-PCR）和端点限制性片段长度多态性（RFLP）分析等，可以使用单个引物，而不需要引物对。这种情况下，引物只需与待扩增序列的一端互补配对即可。【摘要】
PCR扩增何时要引物?何时不要引物?【提问】
亲，你好，我是唐娜老师，很高兴为你解答。PCR扩增实验中，引物是必须的，而不是可选的。PCR是通过引物（Primers）选择性地扩增目标DNA序列的一种方法。引物是DNA的短片段，能与待扩增序列的两个端点互补配对。在PCR反应过程中，引物与待扩增的DNA序列结合，并作为DNA合成的起始点，引导DNA聚合酶进行DNA链的合成。引物的设计要求：- 引物的长度通常在18-30个碱基对之间，一般为20个碱基对；- 引物的GC含量应在40%-60%之间；- 引物的互补端应该避免内在的碱嘌呤（G或A）序列，以防止引物内部的二聚体形成，影响扩增。在PCR反应中，每个反应体系都需要两个引物，一个是正向引物（Forward primer），另一个是反向引物（Reverse primer）。正向引物和反向引物在扩增目标序列两端互补配对，使PCR反应能够特异性地扩增目标序列。在常规PCR扩增中，引物必须存在才能进行扩增。没有合适的引物，无法选择性地扩增目标序列。需要注意的是，在一些特殊的PCR反应中，如反向转录PCR（RT-PCR）和端点限制性片段长度多态性（RFLP）分析等，可以使用单个引物，而不需要引物对。这种情况下，引物只需与待扩增序列的一端互补配对即可。【回答】
荧光定量pcr引物浓度
亲亲您好，很高兴回答您的问题，荧光定量PCR引物浓度的确定一般采用滴定法，首先确定引物的正确浓度，然后终浓度需要滴定，以确定最佳的引物浓度。滴定法一般是以0.5 μM开始，然后逐渐增加，比如1.0 μM、1.5 μM、2.0 μM，以此类推，直到找到最优的浓度，即可得出最佳的引物浓度。【摘要】
荧光定量pcr引物浓度【提问】
亲亲您好，很高兴回答您的问题，荧光定量PCR引物浓度的确定一般采用滴定法，首先确定引物的正确浓度，然后终浓度需要滴定，以确定最佳的引物浓度。滴定法一般是以0.5 μM开始，然后逐渐增加，比如1.0 μM、1.5 μM、2.0 μM，以此类推，直到找到最优的浓度，即可得出最佳的引物浓度。【回答】
PCR引物浓度一般选多少
PCR引物浓度一般选5～20μmol/L。PCR反应五要素：参加PCR反应的物质主要有五种即：引物(PCR引物为DNA片段，细胞内DNA复制的引物为一段RNA链）、酶、dNTP、模板和缓冲液（其中需要Mg2+）。引物有多种设计方法，由PCR在实验中的目的决定，但基本原则相同。PCR所用的酶主要有两种来源：Taq和Pfu，分别来自两种不同的噬热菌。其中Taq扩增效率高但易发生错配。Pfu扩增效率弱但有纠错功能。所以实际使用时根据需要必须做不同的选择。模板即扩增用的DNA，可以是任何来源，但有两个原则，第一纯度必须较高，第二浓度不能太高以免抑制。缓冲液的成分最为复杂，除水外一般包括四个有效成分：缓冲体系，一般使用HEPES或MOPS缓冲体系；一价阳离子，一般采用钾离子，但在特殊情况下也可使用铵根离子；二价阳离子，即镁离子。扩展资料PCR技术的基本原理类似于DNA的天然复制过程，其特异性依赖于与靶序列两端互补的寡核苷酸引物。PCR由变性-退火-延伸三个基本反应步骤构成：①模板DNA的变性：模板DNA经加热至93℃左右一定时间后，使模板DNA双链或经PCR扩增形成的双链DNA解离，使之成为单链，以便它与引物结合，为下轮反应作准备；②模板DNA与引物的退火（复性）：模板DNA经加热变性成单链后，温度降至55℃左右，引物与模板DNA单链的互补序列配对结合；③引物的延伸：DNA模板-引物结合物在72℃、DNA聚合酶（如TaqDNA聚合酶）的作用下，以dNTP为反应原料，靶序列为模板，按碱基互补配对与半保留复制原理，合成一条新的与模板DNA链互补的半保留复制链，重复循环变性-退火-延伸三过程就可获得更多的“半保留复制链”。而且这种新链又可成为下次循环的模板。每完成一个循环需2～4分钟，2～3小时就能将待扩目的基因扩增放大几百万倍。 参考资料来源：百度百科-引物
请问PCR引物浓度是如何设定的?
>>> 一般都稀释成应用液，常用浓度是10uM/L也就是10pM/L.这样的话，20ul体系加1ul，50ul体系加2ul，方便使用！至于引物会不会降解的问题，估计高浓度比低浓度保存时间长说法是对的。但是，通常引物在20度放半年都没有问题，如果不是经常用，可以先取出一部分来用，其余都放-80度保存，可以放很久。引物稀释很简单，一般装引物的管子上都标有引物的量如3.6nM,你直接往管中加360ul的无菌双蒸水溶解就可以了 ，在加水之前要先高速离心管子几分钟，加水后要高速漩涡混匀几分钟就可以用了。
